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深圳市科润达生物工程有限公司

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CA724检测试剂盒
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产品: 浏览次数:157CA724检测试剂盒 
品牌: 德国DRG
规格: 96T/盒
货号: EIA5071
单价: 面议
最小起订量: 1 盒
供货总量: 100 盒
发货期限: 自买家付款之日起 3 天内发货
有效期至: 长期有效
最后更新: 2018-12-11 08:55
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详细信息

CA72-4检测试剂盒(酶联免疫法)

中文名称:CA72-4检测试剂盒(酶联免疫法)

英文名称:CA72-4
货    号:EIA5071
产品规格:96人份/盒
注册证号:国械注进20163402609

【预期用途】该试剂盒用于在人体血清或血浆中定量检测肿瘤相关抗原CA72-4 (TAG-72),仅供体外诊断使用。


【检测原理】

DRG公司的TM-CA 72-4酶免实验是一种基于夹心法原理的固相酶免吸附实验(ELISA)。反应板上的微检测孔包被有能结合CA72-4分子上独特抗原位点的单克隆小鼠抗体。一份含有内源性CA72-4的病人样本在包被孔中与酶联物进行孵育,该酶联物是一种联结有辣根过氧化物酶的抗CA72-4抗体。孵育后,用洗涤液洗去未结合的酶联物。结合上的辣根过氧化物酶的总量与样本中CA72-4的浓度成正相关。加入底物溶液后,显出的颜色强度与病人样品中CA72-4的浓度成正比。

 

【主要组成成分】

  1. 微孔板:12×8孔,可拆,微孔中包被抗CA72-4 单克隆抗体。

  2. 标准品(标准品0-4):5 0.5ml,即用,浓度为0,3,20,50,100U/ml

  3. 质控高&低:2支 冻干粉,0.5ml,见“试剂准备”,质控品的浓度及范围请见试剂瓶标签或质控单

  4. 样品稀释液:一支,3ml,即用

  5. 酶联物:1支 1.4ml,10倍浓缩,标记辣根过氧化物酶的抗CA72-4抗体

  6. 酶联物稀释液:一支,14ml

  7. 底物液:一支 14ml,即用

  8. 终止液:0.5M的硫酸,一支 14ml

  9. 洗涤液(40X):一支 30ml

    注意:用于样品稀释的样品稀释液应视需要而定。

     

    实验需要器材(但试剂盒不提供)

  1. 酶标仪(450±10nm)

  2. 移液器

  3. 吸水纸

  4. 蒸馏水

  5. 计时器

  6. 坐标纸或是数据处理软件

     

    【储存条件】

    未开启的试剂在2-8℃下储存,在保质期内保持其稳定性。不要使用过期的试剂。所有开启了的试剂都应在2-8℃下储存,微孔板需在2-8℃下储存,一旦打开了微孔板的袋子,需小心地将其重新密封。

     

    【样本要求】

    本实验可使用血清或血浆(使用EDTA或肝素抗凝)样品,不要使用溶血﹑脂血﹑黄疸的样品。注意:含叠氮钠的样品不能用于此实验。

    样品采集

    血清

    静脉采血,允许使用凝血,在室温下用离心法分离血清。全血未完全凝固前请勿离心,接受了抗凝剂治疗的病人血液可能需要更长的凝血时间。

    血浆:

    将全血收集到含有抗凝剂的离心管内,收集后马上用离心法分离。

    样品的储存

    样品盖好盖子后,可在实验前2-8℃下储存5天,要更长时间储存,应在-20℃下冻存。在开始实验前应避免反复冻融样品。

    样品的稀释

    在最初的实验中,要是样品的浓度高于最高标准品,则样品应用按实验步骤所描述的用样品稀释液进行稀释和重新检测。在计算浓度时需乘以此稀释系数。

    例子:

  1. 1:10稀释: 10ul的血清+90ul的样品稀释液(充分摇匀)。

  2. 1:100释稀:10ul稀释a)稀释的血清+90ul的样品释稀液(充分摇匀)

     

    【检测方法】

    在使用前将所有的试剂和所需的板条平衡至室温。

    质控品

    在冻干粉中加入0.5ml的蒸馏水使其复溶,并至少放置10min,在使用前充分摇匀。复溶后的质控品需在-20℃下储存。

    洗涤液

    30ml浓缩的洗涤液中加入1170ml的蒸馏水,最终洗涤液的容积为1200ml。稀释后的洗涤液在室温下两星期内保持稳定。

    酶联物

    使用酶联物稀释液按1:10稀释。配制好的酶联物在2-8℃下,一周内稳定。

    如:1.2ml酶联物于10.8ml稀释液配制成最终体积12ml。

    检测步骤

每次实验都应含有一条标准曲线

  1. 将实验所需数目的板条固定在板架上。

  2. 用一次性吸嘴将20ul的标准品﹑质控品和样品加入相应的检测孔中。

  3. 每孔加入100ul的新鲜配制的酶联物。彻底混合十秒,在此步骤里,充分摇匀十分重要。

  4. 在室温下温育120分钟。

  5. 快速弃去检测孔中的内含物,每孔用400ul洗涤液洗板五次,在吸水纸上用力拍板以除去残留的液体。注意:洗板步骤是否正确将直接影响到实验的灵敏度和精确性。

  6. 每孔加入100ul的底物液。

  7. 在室温下温育30分钟。

  8. 每孔加入100ul的终止液终止反应。

  9. 在加终止液后十分钟内,室温下,于450±10nm处读取吸光率。

     

    【结果计算】

  1. 计算标准品﹑质控品和病人样品的平均吸光率。

  2. 以吸光率为Y轴,浓度为X轴,按照从标准品中获得的平均吸光率和其相对应的浓度值,绘制标准曲线。

  3. 利用样品的平均吸光率,在标准曲线上得出其相应的浓度值。

  4. 自动方法:使用立方函数﹑四参数模式或双对数的计算机程序可得到结果。

  5. 样品的浓度可从标准曲线上直接获取。样品的浓度高于最高标准品的浓度则需进一步稀释。在计算样品的浓度的时候,要乘以稀释倍数。

    下面是CA72-4 ELISA的标准曲线的典型例子。

标准品

吸光率(450nm)

零标准品(0 U/ml)

0.08

标准品1(3 U/ml)

0.19

标准品2(20 U/ml)

0.59

标准品3(50 U/ml)

1.16

标准品4(100 U/ml)

2.02

 

【注意事项】

  1. 在使用前所有试剂和样品均需平衡至室温,所有试剂要充分混合但不要起泡。

  2. 一旦实验开始,所有步骤都必须进行到底而不能中断。

  3. 对每种试剂﹑标准品和样品使用一次性的吸嘴,以避免交叉污染。

  4. 吸光率决定于温育时间和温度,在开始实验前,建议准备好所有的试剂,将需要检测的微孔板固定在板架上,这些步骤保证每次加液步骤所需时间相同而没有中断。

按照一般的规律,酶反应时间与温育时间和温度成线性比例。




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